مطالعه اثر آرژنین ٍ، گلوتاتیون اکسید و احیا و ph در فولدینگ خارج سلولی t-pa

چکیده: آنزیم tissue-type plasminogen activator که به اختصار t-pa نامیده می شود، یک فرآورده ترومبولیتیک است که جهت درمان وقایع ترومبوتیک قلبی و مغزی مورد استفاده قرار می گیرد، مشتقی از این فرآورده به صورت نوترکیب در سلول پروکاریوتی اشرشیاکلی با استفاده از تکنیک dna نوترکیب تولید می شود اما بیان بالای t-pa در e. coli باعث تولید این فرآورده بصورت اگریگیت های غیرمحلول اینکلوژن بادی می شود زیرا باکتری ها فاقد سیستم لازم برای فولدینگ پروتئین در شکل طبیعی هستند و لذا لازم است پروتئین تولید شده در شرایط آزمایشگاهی رفولد گردد. مطالعه حاضر به بررسی اثر تعدادی از کمک حلال ها در فولدینگ خارج سلولی t-pa نوترکیب اختصاص دارد. سلول های e. coli بیان کننده t-pa نوترکیب از طریق حل کردن در بافر لیز و سونیکاسون، لیز گردیده و اینکلوژن بادی جداسازی و تخلیص گردید.اینکلوژن بادی پس از دناتوراسیون در بافر حاوی غلظت های بالای اوره و گوانیدین، با روش رقیق سازی رفولد گردیده و اثر کمک حلال های مختلف از جمله آرژنین و گلوتاتیون اکسید و احیا بصورت منفرد و ترکیبی در ph های مختلف بر میزان حلالیت اینکلوژن بادی و فعالیت بیولوژیک تعیین گردید.نتایج مطالعه نشان می دهد که آرژنین در غلظت های 250 تا1000 میلی مولار اثر مثبت بارزی در حلالیت اینکلوژن بادی دارد. همچنین گلوتاتیون در غلظت 2 الی 20 میلی مولار اثر فزاینده ای بر میزان رفولدینگ t-pa نوترکیب داشته افزودن سوکروز در غلظت 500 میلی مولار به مخلوط رفولدینگ باعث بهبود میزان رفولدینگ می گردد.